2024-11-21 08:28:20来源：jinnianhui金年会官网 作者：jinnian金年会官网
第三章 生物制药的根本技能 Chapter 3 Basic Technique For Biopharmacon 第三章 生物制药根本技能 生物制药是把生物体内的具有生物活性的根本物 质，坚持本来的结构和功用，又能在含有多种物质的 液相或固相中较高纯度的别离出来。它是一项严厉、 详尽、杂乱的工艺进程，触及物理、化学、生物学、 工程等方面的常识和操作技能。 问题：1、标准化办法？ 2、怎么发现或研发新药？ 关于一个新研发的生物药物，从查阅文献开端，到探究实 验、条件调查（记载客观）、总结拟定工艺规程、拟定剖析 判定办法，再进行中试扩展，全面调查工艺是否老练，是否 安稳等。 第三章 生物制药根本技能 1、提取法(Extraction) 基 本 制 造 方 法 2、发酵法（ Zymotechnics） 3、化学合成（Chemical synthesize） 4、安排培养法（Tissue culture） 5、现代生物技能(Modern Biotechnics): Gene engineering, Enzyme engineering, Cell engineering , protein Engineering, Fermentation engineering 第三章 生物制药根本技能 生化制药的六个阶段 1. 质料的挑选和预处理 2. 质料的损坏 3. 提取：从质猜中经溶剂别离有效成分，制成粗品的工 艺进程。 4. 纯化：粗制品经盐析、有机溶剂沉积、吸附、层析、 透析、超离心 、膜别离、结晶等进程进行精制的工艺 进程。 5. 浓缩、枯燥及保存 6. 制剂：质料药（精制品）经精细加工制成片剂、针 剂、冻干剂、粉剂等供临床运用的各种剂型。 一. Raw Material Selecting and Pretreatment 质料挑选和预处理 质料挑选的根本准则： 1、在很多的信息资料和实践经历的基础上，挑选方针质料。 2、挑选有效成分含量高的新鲜资料； 3、来历丰厚易得； 4、制作工艺简略易行； 5、本钱比较低； 6、质料的收集不损坏生态环境, 挑选对环境友好的原资料资 源，避免生物入侵。 预处理办法： 1、动物安排先要除掉结缔安排、脂肪安排等非活性部分； 植物种子去壳除脂；微生物要进行菌体与发酵液别离等 根本操作。便于储存和运送。 2、冷冻法预处理：有些资料要冷冻保存或低温保存，以便 按捺微生物和酶的效果。 3、有机溶剂除掉部分水分：用丙酮或乙醇进行脱水和脱脂， 有利于储存。 二、质料的损坏Comminution of Raw Material 质料的损坏：在提取前先将大块的质料损坏或绞碎成适度的 粒度，或将细胞破碎，使胞内活性物质充沛释放到溶液中， 有利于提取或吸附。 动物脏器安排：常用绞肉机机械法损坏； 植物肉质安排：常用磨碎法； 微生物：常用自溶、冷热替换、加砂研磨、超声、加压等 处理办法。 1.机械法：安排捣碎机、匀浆器、研钵、球磨机、全能损坏机、 绞肉机、击碎机、刨片机。 动物安排多在冰冻状况绞碎、溶浆。 2.物理法 A、重复冻融法：把待破碎的样品冷至-20℃-15℃ ，使 之凝结，然后缓慢的溶解，如此重复操作，大部分动物性 细胞及细胞内的颗粒能够破碎。 B、冷热替换法：将资料投入沸水中，在90℃左右坚持数 分钟，当即置于冰浴中，使之敏捷冷却，绝大部分细胞 被损坏。此法多用于细菌或病毒中提取蛋白和核酸。 C、超声波处理法：多用于微生物资料，处理的效果与 样品浓度、运用频率有 关。用大肠杆菌制备各种酶 时，常用50~100mg/L菌体浓度，在1~10KC频率下 处理10~15min。操作时留意避免溶液中气泡的存在。 D、加压破碎法：加气压或水压，达0.59~34.32MPa (210~350kgf/cm2)的压力时， 可使90%以上细胞被 压碎。多用于微生物酶制剂的工业制备。 3. 生化及化学法： A. 自溶法：将新鲜的生物资料存放在必定的pH和 恰当温度下，运用安排细胞中本身的酶系将细胞破 坏，使细胞内含物释放出来的办法。自溶的温度， 动物资料在0-4℃ ，微生物在室温下。自溶时，需 加少数的防腐剂，甲苯、氯仿，以避免外界细菌的 污染。 * 因为自溶时刻较长，不易操控，故制作具有活性的核酸和蛋白质 时比较少用。 B. 溶菌酶处理法：溶菌酶是专注地损坏细菌细胞壁的酶。 多用于微生物，对蜗牛酶、纤维酶及植物细胞也适用。如 用噬菌体感染大肠杆菌细胞制作DNA时，选用pH8.0的 0.1mol/L Tris-0.01mol/L EDTA 制成 2 亿/ml的细胞悬液， 然后加 入100μg~1mg的溶菌酶，在37 °C保温10min， 细菌胞壁即被损坏。 C. 外表活性剂处理法：外表活性剂的分子中，兼有亲脂 性和亲水性基团，能下降水的界面张力，具有乳化、涣散、 增溶效果。常用有：SDS、氯化十二烷基吡啶、去氧胆酸 钠。 三、提 取 Extraction 提取：也称抽提、萃取，便是运用一种溶剂对物质的不同溶 解度，从化合物中别离出一种或几种组分的进程。分为固 体处理（液—固萃取）和液体处理（液—液萃取）。 提取条件的挑选： 1、溶剂:常用水、稀盐、稀酸、稀碱，有机溶剂如乙醇、 丙酮、氯仿、四氯化碳、丁醇等。丁醇提取的pH、温度范 围较广（pH3-6, -2-40℃）。适用于动植物和微生物原 料。 2、pH : 与溶解度和安稳性有很大联系，一般挑选在 pI 的两边。 3、温度：一般在5 ℃ 以下，但对温度耐受力较大的药物，可 恰当的进步温度，使杂蛋白变性别离，有利于提取和纯化。 如胃蛋白酶、酵母醇脱氢酶及多肽激素类，挑选37-50 取，效果较好。 影响提取的要素： ℃ 提 1、被提取物质溶解度的巨细：一般极性对极性；非极性 对非极性；酸对碱；碱对酸；高温；远离等电点。 2、分散效果的影响：分散方程式 G=DF*Δ C/Δ X*t 3、分配效果的影响：分配规律 (C1/C2)恒温、恒压=K 四、别离纯化Separation and Purification 1、盐析法 运用不同的蛋白质在高浓度盐溶液中，溶解度不同程度 的下降来进行别离纯化。在低盐浓度下，溶解度跟着盐浓 度升高而添加，称盐溶效果；当盐浓度不断升高时，不同 蛋白质的溶解度又以不同程度下降并先后分出沉积，称盐 析效果。 长处：设备和条件要求低，安全运用规模广泛。在高盐状况 下，蛋白质不易发生变化，一般在室温下操作。 缺陷：分级别离才干不高。 常用的中性盐：硫酸铵、硫酸镁、硫酸钠、氯化钠、磷酸钠。 盐析时应留意的几个问题： （1）盐饱满度：因为蛋白质的结构和性质不同，盐析 要求的饱满度也不同。要按工艺要求，正确核算饱满度。 （2）pH 值的挑选：蛋白质在pI时的溶解度最小。因而， 进行盐析时的pH，要挑选在被别离蛋白质的pI 邻近。 （3）蛋白质浓度：在相同条件下，蛋白质浓度越大越 易沉积，运用盐的饱满度极限也愈低。蛋白质浓度愈高， 其他蛋白质共沉效果也愈强，这是不期望的。挑选恰当的 蛋白质浓度，可避免共沉的搅扰。 （4）温度：一般在室温下进行，浓盐对蛋白质有维护效果。 但对温度灵敏的，要在低温下进行。 常在0-4 ℃规模内敏捷操作。如尿激酶。 （5）盐析沉积物的脱盐：盐析的沉积别离后，经脱盐才干 取得纯品。最常用的脱盐办法是透析，时刻一般较长，应常 换透析液，留意避免侮辱。 2、有机溶剂沉积法 运用不同蛋白质在不同浓度的有机溶剂中的溶解度差异 而别离意图蛋白质的办法。蛋白质的沉积与溶解，与溶剂的 介电常数有关。下降溶液的介电常数，使其溶解度变小，同 时，还损坏蛋白质的水化膜而使蛋白质沉积分出。 几种溶剂的介电常数 溶剂称号 丙酮 乙醇 20 ℃时的介电常数 4.33 21.4 24 溶剂称号 甲醇 水 2.5mol/L甘氨酸水溶液 20 ℃时的介电常数 33 80 137 介电常数与静电力的联系： F=Q1Q2/Kr2 式中： K—介电常数。指带相反电荷的微粒之间的静电引力。 F—相距为r的2个带电量分别为Q1、Q2点电荷相互效果的静电引力。 经历：如30-40%乙醇沉积的物质，改用丙酮时，其体积分数可削减10%左右。即可用 20—30%的丙酮； 而70-80%乙醇沉积的物质，可用50—60%的丙酮即可。 注：水有较高的介电常数，具有很好的溶剂功用，是一种广谱溶剂。有机溶剂 法比盐析法分辨力强，沉积也好过滤，易枯燥，但对有些生物活性物质能引起 失活和变性。运用时还要留意蒸腾和火灾等。 有机沉积法应留意的问题： （1）操控工艺进程的温度：整个操作进程应在低温下进 行，而且最好是同一温度。 （2）避免溶剂部分浓度过高：参加有机溶剂时拌和要均 匀，速度要恰当，避免部分浓度过高，引起沉积物的损坏、 变性或失活。 （3）及时处理沉积物：沉积物经过滤或离心后，要当即 用水或缓冲液溶解，下降有机溶剂的浓度。 （4）pH的挑选：在待沉积蛋白质的pI邻近。 （5）有机溶剂是酶和蛋白质的变性要素，尤其是对灵敏 酶类。 3、等电点沉积法 运用蛋白质在等电点时的溶解度最低，而各种蛋白质又 具有不同的等电点的特性进行别离的工艺进程。 因为各种蛋白质在等电点时，仍有必定的溶解度而沉积 不彻底，大都蛋白质的等电点又都非常挨近，所以独自运用 效果不抱负，分辨力差，多用于提取后除杂蛋白。实践出产 中常与有机溶剂沉积法、盐析法联合运用。 4、膜别离法 膜别离技能包含超滤、反浸透析、电渗析、微孔过滤、 气体渗析和超精细过滤。 （1）超滤：依据溶质分子和悬浮粒子是否经过多孔膜来 进行筛分。在液压的驱动下，能经过超滤膜的别离粒子的 规模，一般在0.001—0.01μ m。即运用一种特制的膜对溶 液中的各种溶质分子进行挑选性过滤。 长处：本钱低、操作便利、条件温文、能较好地坚持药物 活性、回收率高。适用于酶和蛋白质药物的别离、浓缩、 脱盐、提纯、除菌、除病毒和热原。 （2）反浸透：以高分子透过性薄膜为别离介质，在超越溶液渗 透压力的状况下，使溶液中的溶剂透过薄膜，一起使溶质和不溶 物阻截在膜前。这一进程类似于浸透,但方向相反，即溶剂从高 浓度一侧传递到浓度低的一侧，故称反浸透。 特色：能耗少，体积小，习惯大规模出产。 （3）微孔滤膜：由高分子资料制成的薄膜过滤介质，能够过滤 一般介质不能截留的细菌和微粒。膜的孔径在0.2-10 μ m。 （4）超精细过滤：以聚乙烯醇为主体的中空多孔滤膜，分级性 能在超滤膜与微孔滤膜之间。为0.01~0.2 μ m。用于水的精制、 循环水的净化、除悬浮固体粒子以及糖液、酶液的精制。 5、离子交流层析 选用不溶性高分子化合物作为离子交流剂，别离纯化各 种生化物质。 根本原理：离子交流树脂在水中能溶胀，溶胀后，其分子中 的极性基团（活性基团），具有可分散的离子，能与溶液中 的离子起交流效果；非极性基团作为树脂的骨架，使树脂不 溶于水并具有网状结构，为离子交流的进行及溶液和树脂的 别离发明了条件。离子交流层析包含吸附、吸收、穿透、扩 散、离子交流、离子亲和力等物理化学进程。 树脂品种和理化功用： （1）强酸性阳离子交流树脂：功用团为磺酸基，pH一般 没有约束。 （2）弱酸性阳离子交流树脂：功用团为羧基、酚基。在 酸性溶液中不发生交流，pH愈大交流才干愈强。 （3）强碱性阴离子交流树脂：功用团为三甲基季胺基团。 pH没有约束。 （4）弱酸性阴离子交流树脂：功用团为伯胺基、仲胺基、 叔胺基。 pH愈低交流才干愈大。 影响交流速度的要素： （1）树脂颗粒的巨细：颗粒小，外表积大，能促进内部 和外部分散。 （2）拌和和流速：加快拌和速度或加大液体流速，都能 削减树脂外液膜的厚度，从而使液相分散速度添加。 （3）离子浓度：交流速度随离子浓度的上升而添加，达 到必定浓度后交流速度不在升高。 （4）离子的水化半径：水化半径小的易被吸附。 （5）树脂酸碱性的强弱和溶液的pH： （6）交联度巨细：交联度愈小，树脂愈易胀大，交流速度 愈快。但交联度小的树脂挑选性较差。 （7）有机溶剂的影响：当有有机溶剂存在时，会下降树 脂对有机离子的挑选性，而简略吸附无机离子。 6、凝胶层析 指化合物随活动相流经装有凝胶的固定相的层析柱时， 因其各种物质分子巨细不同而被别离的技能。又称凝胶过滤、 凝胶浸透过滤、分子筛过滤、阻滞分散层析、排阻层析。 长处：设备简略，操作便利，别离效果好，回收率高，分 离条件平缓，不使活性物质失活变性，凝胶可重复运用，无 需再生处理。 缺陷：别离速度慢。 广泛用于别离氨基酸、多肽、蛋白质、酶及多糖等药物。 几种常用的凝胶： （1）葡聚糖凝胶：根本骨架是1—6糖苷键。由葡聚糖和甘 油以醚桥方式交联而成的网状结构。最著名的产品为 Sephadex葡聚糖凝胶，珠状颗粒物，化学性质安稳，不溶于 水、弱酸、碱和盐溶液。低温时，在0.1mol/L 盐酸中坚持 1-2h不改动性质；室温时，在 0.01mol/L 盐酸中放置半年 也不改动；在0.25mol/L的 氢氧化钠中， 60℃ 两个月没有 发改动。可在120℃ 加热 30min 灭菌而不损坏，但高于 120℃ 即变黄。湿状储存易发霉，若长时刻不必，需加防腐剂。 （2）聚丙烯酰胺凝胶：由碳—碳骨架构成。彻底为慵懒。 安稳性比葡聚糖凝胶好，洗脱时不会有凝胶物质下来。 缺陷：不耐酸。遇酸时酰胺键会水解为羧基，使凝胶带 有必定的离子交流基团。 （3）琼脂糖凝胶：天然凝胶，不是共价交联，是以氢 键交联。空地度以契纸糖的浓度来改动，化学安稳性不如 葡聚糖凝胶。没有干凝胶，有必要在溶胀状况保存，遇脱水 剂、冷冻和一些有机溶剂即损坏，丙酮和乙醇对它无影响。 在pH 4.5-9,温度0-40 ℃ 安稳。对硼酸有吸附，不能用硼 酸缓冲液。他能别离及万到几千万相对分子质量的物质， 弥补了葡聚糖和聚丙烯酰胺凝胶的缺乏。 瑞典产品名Sepharose，美国称生物凝胶—A（BioGel-A）,英国称Sagavac. (4)疏水性凝胶：常用的为聚甲基丙烯酸酯 （Polymethacrylate）凝胶、聚苯乙烯凝胶（如Styrogel , Bio-Beads-S） 7、亲和层析 生物活性物质都有亲和效果，如酶与底物、激素与受体、 核酸的互补链间，多糖与蛋白质复合体。亲和层析是运用生 物大分子的特异亲和力而规划的层析技能。可逆结合的特异 性物质称为配基，与配基结合的层析介质称为载体。 亲和层析能从粗提液中，经过一次简洁处理，便可得到高纯 度的活性物质，既可别离一些生物资猜中含量极微的物质， 又能别离一些性质非常相似的物质。 长处：设备要求不高，操作简洁，适用规模广，特异性强， 别离速度快，效果好，条件温文。 缺陷：通用性较差，洗脱条件要求严苛。 几种常用的载体： （1）纤维素：自然界中数量最大的大分子生物资料，取 材非常便利。但因为其结构严密、均一性差，不利于大分 子的进入。活化后常带有电荷，非特异性吸附较强，加上 空间位阻等原因，其运用不如凝胶载体广泛。现在首要用 于别离与核酸有关的物质。如用寡聚脱氧胸腺核苷酸纤维 素作固定相别离细胞提取液中的mRNA. 市售产品有：无定型微纤维、微晶纤维素、珠状纤维素。 （2）琼脂糖凝胶：用于亲和层析的首要为交联珠状凝胶。其琼 脂糖的质量浓度为20g/L(2%)、40g/L(4%)、60g/L(6%)几种， 相应的产品称为Sepharose 2B、4B、6B(Pharmacia)和 Ultrogels A-2,A-4,A-6)。这类载体能使吸附物质坚持活性， 能敏捷活化并接上各种功用基团，结构疏松孔径大，流速快。 （3）葡聚糖凝胶：与琼脂糖凝胶比较孔径太小，特别是经配 基偶联后，凝胶胀大度会进一步边小，所以运用受到约束。 （4）聚丙烯酰胺凝胶：碳—碳骨架，有丙烯酰胺和甲叉双丙烯 酰胺聚合而成，具有网状三维空间结构。产品名为Biogel P。 留意避免触摸强氧化剂，配基偶联后会使它的网格缩小，在一 定程度上约束了它的运用。 （5）多孔玻璃珠：化学和物理安稳性好，机械强度高， 不但能抵挡酶及微生物的效果，还能耐受高温灭菌和较剧 烈的反响条件。 缺陷：亲水性不强，对蛋白质尤其是碱性蛋白质有非特 异性吸附，而且可供衔接的化学活性基团也少。 改善办法：为了战胜其缺陷，市售Bio-Glass的产品都已 事前衔接了氨烷基（烷基胺）。用葡聚糖包被玻璃珠，则 可改善其亲水性，并添加化学活性基团。用抗原涂布的玻 璃珠已成功地别离了免疫淋巴细胞，在DNA衔接的玻璃珠 上纯化了大肠杆菌的DNA和RNA聚合酶。 （6）其他载体： 由聚丙烯酰胺和琼脂糖混合组成的载体，产品名为 Ultrogels ACA。它的特色是载体上既有羟基又有酰胺基， 而且都能与配基独自效果。但不能触摸强碱，避免酰胺水 解，运用温度不超越40 °C。 在丙烯酰胺和琼脂糖的混合胶中参加7%的四氧化三铁， 则可制得一种称为磁性胶（Magnogels ACA44）的载体。当 悬浮液中含有不均匀粒子时，依托磁功用将载体与其他粒 子别离。磁性胶载体常用于酶的免疫测定、荧光免疫测定、 放射免疫测定、免疫吸收剂和细胞别离等的微量测定和制 备。 影响吸附亲和力的几个要素： （1）配基浓度； （2）空间妨碍； （3）配基与载体的结合位点； （4）载体的孔径； （5）微环境（化学要素）。 Concentration 浓缩 浓缩：低浓度溶液经过除掉熔剂边为高浓度溶液的进程。常 在提取后和结晶前进行，有时也贯穿与整个制药进程。 蒸腾设备的规划原理：加热、扩展液体外表积、低压。 ? 薄膜蒸腾浓缩Film evaporation concentration 卧式喷淋 降膜蒸腾器、Rose蒸腾器、板式蒸腾器 ? 减压蒸腾浓缩Decompression evaporation concentration 减压抽真空（真空浓缩），适用不耐热的药物和制品。 薄膜蒸腾流程图 吸收浓缩Absorbing concentration 经过吸收剂直接吸收除掉溶液中的溶剂分子使溶液浓缩 的办法。吸收剂与溶液不起化学反响，对生化药物不起吸附 效果，易与溶液分隔。吸附剂除掉溶剂后可重复运用。 常用的吸收剂：聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖、凝 胶。 凝胶可直接投入待浓缩的溶液中，溶剂和小分子被吸收 到凝胶内，大分子留在溶液中，然后离心过滤。运用聚乙二 醇时，先将溶液装入半透膜的袋内，扎紧袋口，外加聚乙二 醇掩盖，袋内溶剂渗出即被聚乙二醇吸去。 Crystallization 结晶 结晶：运用某些药物具有构成晶体的性质是方针药物（溶质） 呈晶态从溶液中分出的进程。 结晶的条件： （1）纯度purity：各种物质在溶液中均需到达必定的纯度才 能分出结晶。蛋白质和酶，纯度不低于50%。总趋势是越纯 越易结晶，但已结晶的制品不标明到达了肯定的纯化，只 能说到了适当纯的程度。有时纯度不高，但参加有机溶剂 和制成盐，也能到达结晶。 （2）浓度consideration：结晶液的浓度要较高，以利于 分子间的磕碰聚合。但浓度过高，相应杂质和溶液黏度增 大，反而不利于结晶，或生成纯度较差的粉末结晶。 （3）pH：挑选pH在pI邻近，有利于晶体分出。 （4）温度 temperature：一般在低温条件进行，活性物质 不易变性，又可避免细菌繁衍。 （5）时刻Time：结晶的生成和成长需求时刻。但生物药物 要求在几小时内完结，时刻不宜过长。 （6）晶种 Crystal seed：不易结晶的药物常加晶种。 干 燥 Desiccation 枯燥：是从湿的固体生物药物中，除掉水分或溶剂而取得相 对或肯定枯燥制品的工艺进程。它也是一种蒸腾，但不同 于浓缩。一般包含质料药的枯燥和制成的临床制剂的枯燥。 （1）常压枯燥 Normal press desiccation：通风与加热 结合。本钱低枯燥量大。但时刻长，易污染。 （2）减压枯燥 Decompression desiccation：运用专用设 备减压加快，使溶剂敏捷蒸腾。时刻短，温度低。制药常 用办法。 （3）喷雾枯燥 Spray desiccation：将液体经过喷发设备 喷成雾滴后，在必定流速的热气流中，敏捷蒸腾枯燥的办法。 从理论计算：每升液体，假如喷成10μ m直径的雾滴，约 有1.91*1012多个，外表积有600m2。试验标明：把含水量为 80%的1L溶液，喷成直径约10-60 μ m雾滴，当与热空气触摸 时，仅3-5s可使雾滴水分气化而得到枯燥产品。 长处：快速高效，可在无菌条件下操作，运用广泛。 缺陷：热运用率不高，设备费用出资大。 （4）冷冻枯燥Freezing desiccation：在低温（ -60-10 ℃ ）及高线mmHg）下，将物料与溶 液中的水分直接提高的枯燥办法。 适用于高度热敏的生物药物。制剂应具有多孔性、疏松、 易溶的特色，一般含水量在1%-3%。设备出资及维护费用高， 出产才干不大。 改善的枯燥设备 ? 环型喷发枯燥器 ? 振荡活动枯燥器 ? 涡流枯燥器 Sterilization 灭菌 灭菌：指杀灭或除掉悉数微生物的操作技能。 ? 干热空气灭菌：一般在烘箱里运用热空气杀灭微生物，在 100 ℃，1h可杀死繁衍的细菌。但某些细菌在必定状况下 能够变成芽孢，有较强的耐热力，一般需160-170 ℃ 灭菌 1h以上或140 ℃灭菌3h以上。灭菌的时刻应自悉数进行灭 菌的物品到达灭菌温度时算起。待灭菌物品的温度常落后 于烘箱室的温度，特别是导热功用差或装量大的待灭菌物 品。要保证灭菌彻底，应测定温度拖延时刻，将拖延的时 间考虑到规则的灭菌时刻内。 湿热灭菌： 常压灭菌，即在常压下用100 ℃流转蒸汽或在水内煮沸来 杀灭细菌。 减压灭菌：在热压灭菌器中，用超越101.325kPa的饱满蒸 汽杀灭细菌。 热压灭菌所需温度、相对压力和时刻： 115.5 ℃ 121.5 ℃ 126.5 ℃ 1.7 2.0 2.4 kgf/cm2 kgf/cm2 kgf/cm2 (表压 0.7 kgf/cm2 ） (表压 1.0 kgf/cm2 ） (表压 1.4 kgf/cm2 ） 30min 20min 15min ? 紫外线灭菌：首要用于空气和物体的外表灭菌。一般紫外 灯高度距操作台面不超越1.5m，被灭菌物距灯与台面的垂 直点中心不超越1.5 m。用于室内空气灭菌时，约6-15m3的 空间装一盏紫外灯。 人体若照耀紫外线过久会发生眼结膜炎、红斑和皮肤变 红等。故一般均在操作前照耀1-2h。若操作时有必要照耀时， 对操作人员的眼睛和皮肤要加以防护。 过滤灭菌：经过适合的滤器除掉药液中所含的细菌。常用 有硅藻土滤柱、素瓷滤柱、垂熔玻璃滤器、石棉板吕器和 微孔滤膜（纤维素酯膜、聚碳酸酯膜）。滤器孔径约为 0.2μ m时，灭菌成果才牢靠。 适用于不耐热的药物溶液的灭菌、除掉活菌和死菌。灭 菌后的药液进行分装时，要特别留意避免染菌，应进行无 菌操作。 化学灭菌：用化学药品按捺或杀灭细菌的办法。常用其 气体或蒸汽杀灭细菌的药品有甲醛、丙二醇、乳酸等，适 用于无菌室的空气灭菌。 小结 生物制药是运用必定的生物制备技能从生物资猜中获取 特别的生物活性物质的进程。 需求常常留意的几个问题： 1、生物资料的组成成分杂乱，各种化合物的形状、巨细、 相对分子质量和理化性质都各不相同，有些还归于不知道。 且这些化合物在别离时仍在不断的代谢之中。 2、有些化合物含量很低或极微。制备时，原资料用量很大， 得到产品很少。？？？？Fishing 3、生物活性物质，一旦离开了生物体内环境，很易变性。 4、别离制备的进程几乎在溶液中进行，各种温度、PH、 离子强度等参数，对溶液中各种组成的归纳影响，常常无 法固定，有些试验或工艺规划的合理性不强，常带有很大 的经历成分。因而，要树立重复性好的老练工艺，对生物 资料、各种试剂及其辅料都要加以严厉规则。 5、生物药物“均一性”证明与化学药物的“纯度”是不同 的。结构与功用（活性）的联系？
